Практична частина

Відео: Урок 17. Практична частина (теорія)

Основні принципи та етапи бактеріологічного дослідження

1. Кваліфікований вибір матеріалу, що підлягає дослідженню: для клінічних зразків - з урахуванням характеру і локалізації патологічного процесу, патогенезу захворювання і його стадії-для об`єктів навколишнього середовища - з урахуванням можливого значення їх в якості шляхів і факторів передачі мікроорганізмів - збудників інфекцій.

2. Відбір проб матеріалу для дослідження в необхідному і достатньому обсязі. Забезпечення своєчасної доставки матеріалу для збереження життєздатності шуканих бактерій.

3. Вибір оптимального набору відповідних поживних середовищ для первинного посіву та накопичення збудника з урахуванням характеру матеріалу, властивостей шуканого мікроорганізму і посівних доз.

4. Дотримання класичних принципів ретельного вивчення посівів.

5. Вивчення фенотипічних характеристик виділених чистих культур, в першу чергу, біохімічних властивостей з максимально можливою стандартизацією умов їх визначення.

6. Визначення згідно класифікаційних таблиць таксономічного положення виділеної культури відповідно до завдань дослідження (родовий, видовий, внутрішньовидової приналежності). Бактеріологічне дослідження проводиться в кілька етапів:

1. Посів доставленого матеріалу на середовища збагачення. Для деяких видів матеріалів здійснюють попередню підготовку їх для посіву, а потім інкубацію посівів для всіх видів за умов, відповідних властивостей шуканих бактерій.

2. Вивчення чашок з посівами. Виділення чистих культур з намічених колоній для подальшого вивчення з використанням для цього комбінованих середовищ для первинної ідентифікації.

3. Облік результатів посіву в комбіновані середовища пос `` ле 18-20 годин інкубації. Вивчення морфологічних ітинкторіальних властивостей. Посіви для відтворення тестів мінімального дифференцирующего ряду. I Орієнтовний вивчення культур в реакціях агглю- j тінаціі.



4. Визначення роду і виду мікроорганізмів на підставі обліку результатів посівів в середовища мінімального дифференцирующего ряду. При необхідності проводити посіви для визначення додаткових біохімічних ознак.

5. Облік додаткових біохімічних тестів.

Схема бактеріологічної діагностики коліентеритів

Бактеріологічному дослідженню на вміст ен-теропатогенних кишкових паличок піддають випорожнення, блювотні маси, слиз із зіву і носа, при дослідженні секційного матеріалу - кров із серця, шматочок легкого, печінки, селезінки, нирок, відрізки тонких і товстих кишок.

Якщо випорожнення не можуть бути доставлені в лабораторію в перші дві години з моменту взяття, їх зберігають в льодовику при температурі + 4 ° С, але не довше доби або консервують в гліцеринової суміші.

З огляду на, що при коліентеритів уражається переважно тонкий кишечник, доцільніше досліджувати останні порції калу.

1-й день: матеріал, що надійшов на дослідження, засівають на щільні накопичувальні живильні середовища: Ендо, Левіна, ВСА.

При посіві випорожнень невелика кількість матеріалу емульгують в фізіологічному розчині. Після осідання великих частинок з поверхні рідини беруть 1-2 краплі приготовленої суспензії, вносять її в чашку Петрі і на невеликій ділянці живильного середовища розтирають стерильним скляним шпателем. Потім шпатель відривають від поверхні агару, і не пропалюючи його, розподіляють залишок матеріалу по решті поверхні чашки.

2-й день: переглядають посіви, зроблені напередодні. Колонії ентеропатогенних кишкових паличок не відрізняються від колоній непатогенних кишкових паличок. На чашках із середовищем Ендо вони мають круглу форму, рівний край, матову поверхню, малиново-червоний колір.

З 10 ізольованих колоній з культурально-морфолого-ня ознаками, характерними для кишкової палички, беруть частину матеріалу для пробної аглютинації на склі так, щоб решта колонії в разі потреби могла бути використана для подальшого дослідження. З матеріалом кожної колонії окремо ставлять реакцію аглютинації на склі з нерозведеної агглютинируют комплексної ОВ-коли-сироваткою.

При позитивному результаті реакції аглютинації досліджувана культура в першу ж хвилину спостереження утворює добре видимі неозброєним оком великі пластівці аг-глютіната. Матеріал з 3-5 колоній, бактерії яких агглютініровалісь сумішшю сироваток на предметному склі, відсіваються в пробірки зі скошеним мясопептонний агаром (МПА) для подальшого вивчення чистої культури.

3-й день: переглядають посіви на скошеному МПА. На поверхні агару кишкова паличка утворює вологий, блискучий наліт сіруватого кольору. Культури, які виросли на МПА, перевіряють повторно в реакції аглютинації на склі.

Мікробну культуру, вирощену на скошеному МПА і дала повторно реакцію аглютинації на склі, пересівають:

а) для вивчення сахаролитических властивостей в середовища Гіса з глюкозою, лактозою, манітом, мальтозою, сахарозой- б) для виявлення індолу в пробірку з бульйоном Хот-тінгера- в) для виявлення сірководню в мясопептонний бульон- г) для виявлення активної рухливості проводять посів в напіврідкий поживний агар.

4-й день: реєструють в протоколі проведені дослідження.

Схема мікробіологічного дослідження сальмонел

Найбільш раннім і достовірним методом діагностики черевного тифу і паратифів слід вважати виділення гемокультури, так як бактеріємія у хворих виникає з кінця інкубаційного періоду і триває протягом усього гарячкового періоду хвороби. Частота виділення збудника з крові хворого в 1-й тиждень захворювання досягає 100%. З 2-го тижня відсоток позитивних результатів зменшується. Кров для посіву беруть з вени ліктьового згину: на 1-му тижні в кількості 10 мл, на 2-й і 3-му тижні - 15-20 мл.

З 3-го тижня захворювання, в зв`язку з тим, що патологічний процес і відповідно збудник захворювання зосереджуються в лімфатичному апараті кишечника, починається інтенсивне виділення бактерій із випорожнень.

Виділення бактерій черевного тифу з крові 1-й день: кров хворого засівають негайно після взяття у флаконі 10-20% жовчним бульйоном. Жовч, що міститься в поживних середовищах, сприяє зростанню сальмонел і запобігає згортання крові.

2-й день: переглядають колби з посівами, зробленими напередодні. Розмноження бактерій в жовчному бульйоні в перші 2-3 дні після проведеного посіву не завжди супроводжується помутнінням середовища. Тому незалежно від того, помутніла середовища або немає, роблять висів на чашки з вісмут-сульфітним агаром і середу Плоскірєва. Засіяні середовища ставлять в термостат разом з первинним посівом крові. Останній зберігають для повторних висівів на той випадок, якщо на щільних поживних середовищах виявляться колонії, характерні для сальмонел. Повторні висіву зі середовищ збагачення виробляють на 2-е, 3-й, 5-е, 7-е і 10-е добу. При відсутності характерних колоній після висіву, виробленого на 10-ту добу, лабораторія дає негативну відповідь і припиняє дослідження.lt; lt; ПопереднєНаступна gt; gt;

Увага, тільки СЬОГОДНІ!