Відбір проб і попередня обробка ґрунтових зразків для аналізу
Відео: Аналіз грунту без секретів
Санітарне обстеження, вибір точок відбору пробОсновними об`єктами, території яких підлягають контролю органів санітарного нагляду із застосуванням санітарномікробіологіческіх методів дослідження, які вимагають проведення ряду заходів щодо запобігання забруднення грунту, є: дитячі та лікувально-профілактичні установи-сільські і неканалізовані райони міських населених пунктів-території першого поясу зони санітарної охорони джерел господарс -пітьевого водопостачання- зони свалок- відвальні площадкі- сільськогосподарські поля, зрошувані водою з відкритих одоемов, стоками тваринницьких ферм- землеробські поля зрошення міськими і промисловими стічними водами.
Обов`язковим попереднім етапом при санітарно-бактеріологічному дослідженні є санітарне обстеження та складання паспорта обстежуваного ділянки із супровідним талоном.
Паспорт обстежуваного ділянки:
1. Номер ділянки.
2. Адреса ділянки і його прив`язка до джерела забруднення.
3. Дата обстеження.
4. Розмір ділянки.
5. Назва грунтів.
6. Рельєф.
7. Рівень залягання грунтових вод.
8. Рослинний покрив території.
9. Характеристика джерела забруднення (характер виробництва, що використовується сировина, потужність виробництва, обсяг газопилових викидів, рідких і твердих відходів, видалення від житлових будівель, ігрових майданчиків, місць водозабору і т. Д.).
10. Характер використання ділянки (дитячий майданчик, підприємство і т. Д.).
11. Відомості про використання ділянки в попередні роки (меліорація, застосування засобів хімізації та ін.). Виконавець, посаду. Особистий підпис. Розшифровка підпису
Супровідний талон містить наступні дані:
1. Дата і час відбору проби.
2. Адреса.
3. Номер ділянки.
4. Номер пробної майданчики,
5. Номер об`єднаної проби, горизонт (шар), глибина взяття проби.
6. Характер метеорологічних умов в день відбору проби.
7. Особливості, виявлені під час відбору проби (освітлення сонцем, застосування засобів хімізації, наявність звалищ, очисних споруд і т. Д.).
8. Інші особливості.
Внизу ставиться підпис лікаря або помічника санітарного лікаря, який проводив санітарне обстеження земельної ділянки.
На підставі результатів санітарного обстеження території та її опису складається схематичний план земельної ділянки з нанесенням джерел забруднення. Це дозволяє правильно обгрунтувати вибір точок відбору проб ґрунту.
На досліджуваної території за наявності одного джерела забруднення виділяють дві ділянки 25 м2 кожен: один поблизу джерела забруднення (досвідчений), інший - далеко (контрольний). Контрольний вибирають з таким розрахунком, щоб він був свідомо незабрудненим і мав однаковий грунтовий склад з досвідченим.
Відбір зразків ґрунту
Проби ґрунту відбираються на кожній з ділянок в його п`яти точках по діагоналі або по «конверту» (чотири точки по кутах і одна в центрі).
Якщо дослідника цікавлять наслідки безпосереднього внесення хімічної речовини в грунт, то проби відбираються поверхнево (0-1 см) стерильним інструментом (ніж, шпатель) в кількості 0,3-0,5 кг в одній точці.
Якщо вивчається вплив хімічної речовини на мікрофлору грунтового горизонту, то для відбору проб ґрунту користуються такою методикою. Кожна точка, в якій проводиться відбір проб ґрунту, являє собою центр обраного для дослідження 1 м2 території. Тут викопується шурф розміром 0,3 х 0,3 м і глибиною 0,2 м. Поверхня однієї зі стінок шурфу очищають стерильним ножем. Потім з цієї стінки вирізують грунтовий зразок, розмір якого обумовлений заданої навішуванням. Так, якщо необхідно відібрати 200 г грунту, розмір зразка 20 см х 3 см х 3 см-500 г - 20 см х 5 см х 30 см.
При вивченні впливу пестицидів та інших хімічних речовин на мікрофлору і процеси самоочищення в більш глибоких шарах грунту, для відбору проб ґрунту користуються шурфом глибиною до 1 м. Проби відбираються з стінки шурфу стерильним інструментом через кожні 10 см.
Відібрані зразки поміщають в стерильний посуд і доставляють в лабораторію. При неможливості приступити до дослідження грунту негайно, допускається зберігання зразка при температурі 4-5 ° С, але не більше 24 годин.
Підготовка та обробка грунту для аналізу
Для приготування середнього зразка об`ємом 0,5 кг грунт всіх зразків однієї ділянки висипають на стерильний щільний аркуш паперу, ретельно перемішують стерильним шпателем, відкидають камені та інші тверді предмети. Потім грунт розподіляють на місці рівним тонким шаром у формі квадрата.
Діагоналями грунт ділять на 4 трикутника. Грунт з двох протилежних трикутників відкидають, а решту знову перемішують, знову розподіляють тонким шаром і ділять діагоналями і так до тих пір, поки не залишиться приблизно 0,5 кг.
Перед посівом грунт диспергируют, тобто грунт з дотриманням умов стерильності просівають через сито діаметром 3 мм. При просеваніі сито зверху покривають стерильною папером.
Для обліку грунтових мікроорганізмів і ентеровірусів досить навішування від 1 до 10 г, для санітарно-показник-них мікроорганізмів від 1 до 30 г, для патогенних ентеро-бактерій (50-50,5 г). Перше розведення навішування грунту (1: 10) роблять в стерильному посуді, додаючи стерильну водопровідну воду в співвідношенні 1: 10 до ваги грунту (наприклад: 1 г води, 10 г грунту - в 100 мл води і т. П.).
Далі проводять попередню обробку грунту, метою якої є отримання клітини мікроорганізмів з грунтових агрегатів.
Основними прийомами попередньої обробки грунту є:
1) 10-хвилинне вертикальне струшування грунтової суспензії першого розведення в пробірках з гумовими пробками - при навішуванні грунту 1 г-
2) 3-хвилинна обробка грунтової суспензії на механічній мішалці.
Грунтову суспензію, яка містить в 1 мл 0,1 г грунту, через 30 секунд після попередньої обробки (за цей час осідають грубі мінерали) використовують для приготування послідовно відбувають концентрацій грунту. Для цього з першого розведення, що знаходиться у флаконі, з вмістом грунту 0,1 ГМЛ стерильною піпеткою відбирають 1 мл і переносять в пробірку з 9 мл стерильної водопровідної води. При цьому здобувають другу розведення, що містить 0,01 ГМЛ грунту. Повторюючи цю операцію, доводять розведення грунту до 0,0001-0,00001 ГМЛ.
Приготовлені розведення використовуються для посіву на різні поживні середовища з метою визначення мікробіологічних показників.
Санітарнобактеріологіческое дослідження грунту
До методів визначення мікробіологічних показників, що характеризують фекальне забруднення грунту, відносяться наступні:
1. Визначення кількості бактерій групи кишкових паличок, ентерококів, ентеровірусів.
2. Визначення кишкових паличок в грунті титраційна методом.
3. Визначення кишкових паличок в грунті методом мембранних фільтрів.
4. Прямий поверхневий посів на щільних поживні середовища для обліку кишкових паличок в грунті.
5. Визначення в грунті загальної кількості бактерій,
6. Визначення Clostridium perfringens в грунті.
7. Визначення термофільних бактерій.
8. Визначення в грунті нитрифицирующих бактерій.
До методів визначення мікроорганізмів, що характеризують забруднення і самоочищення грунту від органічних і хімічних забруднень, відносяться:
1. Визначення загальної чисельності грунтових сапрофітних мікроорганізмів.
2. Визначення загальної чисельності грунтових мікроорганізмів методом прямої мікроскопії.
3. Визначення загального числа і відсотки ґрунтових бацил.
4. Визначення кількості грибів і актиноміцетів в грунті.
5. Визначення аеробних целлюлозоразлагающіе мікроорганізмів.
6. Визначення аммонификаторов в грунті.
7. Визначення токсичності грунтів до мікроорганізмів.
До методів визначення патогенних бактерій і вірусів в грунті відносяться наступні:
1. Визначення сальмонел в грунті.
2. Індикація і виділення патогенних клостридій з грунту.
3. Ідентифікація та виділення правцевий палички.
4. Індикація та виділення ботулінічним палички.
5. Виявлення сібіреязвенной палички в грунті.
6. Санітарно-вірусологічне дослідження грунту.
Основні методи визначення мікробіологічних показників, що характеризують фекальне забруднення грунтів
Визначення кишкових паличок в грунті тітра1щонним методом
З першого розведення грунтової суспензії (1: 10) беруть 10 мл і засівають у флакони з 50 мл рідких середовищ (Кес-слера або лактозного бульйону з тріфенілтетразолій хлориду ТТХ). Посів меншої кількості (0,1 г, 0,01 гіт. Д.) Роблять по 1 мл з відповідних розведень грунтової суспензії в пробірки з 9 мл тих же середовищ.
Перед посівом в кожну пробірку з лактозною бульйоном додають по 0,3 мл 2% водного розчину ТТХ, а в кожен флакон- по 1,5 мл. Методика з використанням ТТХ заснована на здатності кишкової палички відновлювати безбарвне з`єднання ТТХ з тріфенілформазаном, що випадає у вигляді осаду і надає середовищі коричнево-червоний колір. Кишкова паличка стійка до дії формазану, в той час як розвиток іншої мікрофлори гальмується.
Посіви на середовищі Кесслера вирощують 48 годин при 43 ° С або 37 ° С. Відсутність через 48 годин газоутворення і помутніння в бродильних судинах дає остаточний негативну відповідь на наявність бактерій групи кишкових паличок. Негативна відповідь на лактозна бульйоні з ТТХ дається через 24 години в тому випадку, якщо в пробірках і флаконах колір середовища не змінився.
При наявності в судинах із середовищем Кесслера газоутворення і помутніння або тільки помутніння проводять висів на середовище Ендо. Чашки з посівами поміщають в термостат на 24 години при температурі 37 ° С.
Відсутність зростання на чашках дає остаточний негативну відповідь.
При наявності на поверхні середовища Ендо рожевих або червоних колоній грамнегативних паличок з негативною оксидазної активністю, їх підраховують і зараховують до бактерій групи кишкових паличок після підтвердження ферментації глюкози. Для цього засівають 2-3 колонії кожного типу в напіврідку середу з глюкозою. Облік виробляють через 4-5 і 18 годин інкубації при 37 ° С. Якщо за цей час в середовищі відбувається утворення кислоти і газу, то це підтверджує наявність кишкових паличок в досліджуваному розведенні грунту. Результати аналізу виражають коли-титром.
Визначення в грунті загальної кількості бактерій
Для характеристики в грунті загального мікробного забруднення фекального походження використовують визначення чисельності мікроорганізмів, переважно бактерій, властивих на мясопептонном агарі при 37 ° С. При цьому проводять посів грунтових розведень в 1,5% мясопептонний агар. З кожної проби грунту для посіву має бути використано не менше двох різних розведень. Беруть 1 мл суспензії і переносять на дно стерильної чашки. З кожного розведення посів роблять мінімум на 2 паралельні чашки. Після в кожну чашку вливають попередньо розплавлений і охолоджений до 45 ° С живильний агар в кількості 15-20 мл. Чашки Петрі з розплавленим агаром добре перемішують з наявної там грунтової суспензією. Потім чашки поміщають на строго горизонтальну поверхню до затвердіння середовища.
Після застигання агару чашки з посівом в перевернутому вигляді поміщають в термостат при 37 ° С на 24 години.
Після інкубації підраховують виросли колонії.
Визначення в грунті загальної кількості бактерій
Для характеристики в грунті загального мікробного забруднення фекального походження використовують визначення чисельності мікроорганізмів, переважно бактерій, що ростуть на мясопептонном агарі при 37 ° С. При цьому проводять посів грунтових розведень в 1,5% мясопептонний агар. З кожної проби грунту повинно бути використано для посіву не менше двох різних розведень. Після ретельного перемішування беруть по 1 мл суспензії і переносять на дно двох стерильних чашок Петрі. У кожну чашку вливають живильний агар в кількості 15-20 мл розплавленого і охолодженого до 45 ° С. Потім чашки поміщають на строго горизонтальну поверхню до затвердіння середовища.
Після інкубації при температурі 37 ° С 24 години підраховують виросли колонії.
Визначення клостридиум перфрингенс в грунті
З усіх приготованих грунтових розведень (до 1: 1000 000) по 1 мл переноситься в два паралельних ряди пробірок. Один ряд пробірок прогрівають при температурі 80 ° С протягом 15 хвилин або при 90 ° С - 10 хвилин. Потім в усі пробірки наливають по 9-10 мл середовища Вільсон-Блер. Інкубація посівів проводиться при 37 ° С протягом 24 годин.
Cl. perfringens утворюють колонії чорного кольору, в мазках - грампозитивні палички.
Визначення в грунті нитрифицирующих бактерій
Нитрифицирующие бактерії завершують цикл перетворення в грунті азотовмісних сполук, окислюючи аміак до нітритів і нітратів. Тому чисельність цих мікроорганізмів досить чітко вказує на ступінь органічного забруднення, швидкості і закінчення розпаду органіки в грунті.
Визначення нитрификаторов можна виробляти посівом розведень грунтової суспензії на щільних або рідких середовищах. Найчастіше для цих цілей застосовується середу Виноградського. Для цього роблять посів грунтових розведень у флакони з середовищем, розлитої тонким шаром. У досвід рекомендується включати два незаражених флакона з середовищем, що служить контролем на чистоту середовища. Посіви інкубують при 28 ° С протягом 14-15 діб.
При розвитку нитрифицирующих бактерій в середовищі поступово утворюються азотистая і азотна кислоти. Освіта окисних сполук азоту рекомендується перевіряти на 5-7-й день після посіву і вдруге на 14-15-й день. Титр нитрифицирующих бактерій найчастіше встановлюють за допомогою якісної проби з діфенілаланіном- в присутності азотної та азотної кислот цей реактив дає синє забарвлення. Для цього піпеткою кілька крапель середовища з кожного флакона, що не взмучивая осад, переносяться на скляну пластинку. Потім додають кілька крапель розчину дифениламина в концентрованої сірчаної кислоти. Поява синього забарвлення вказує на присутність в середовищі нітратів, як результат розмноження нитрифицирующих бактерій. Середа контрольних флаконів не повинна давати зміни забарвлення.
Поділитися в соц мережах:
Схожі
