Мікрофлора води
Відео: Досліди з водою
Вода є природним місцем існування багатьох мікробів. Основна маса мікробів надходить з грунту. Кількість мікробів в 1 мл води залежить від наявності в ній поживних речовин. Чим вода сильніше забруднена органічними залишками, тим більше в ній мікробів. Найбільш частими є води глибоких артезіанських свердловин, а також джерельні води. Зазвичай вони не містять мікробів. Особливо багаті мікробами відкриті водойми та річки. Найбільша кількість мікробів в них знаходиться в поверхневих шарах (в шарі 10 см від поверхні води) прибережних зон. З віддаленням від берега і збільшенням глибини кількість мікробів зменшується. У чистій воді знаходиться 100 200 мікробних клітин в 1 мл, а в забрудненій - 100 300 тис. І більше.Річки в районах міст часто є природними приймачами стоків господарських і фекальних нечистот, тому в межах населених пунктів різко збільшується кількість мікробів. Але в міру віддалення річки від міста число мікробів поступово зменшується, і через 3-4 десятка кілометрів знову наближається до початкової величини. Це самоочищення води залежить від ряду факторів: механічне осадження мікробних тіл, зменшення в воді поживних речовин, засвоюваних мікробами, дія прямих променів сонця, пожирання бактерій найпростішими і ін.
Якщо вважати, що бактеріальна клітина має об`єм 1 мк3, то при утриманні їх в кількості 1000 клітин в 1 мл, вийде близько тонни живої бактеріальної маси в кубічному кілометрі води. Така маса бактерій здійснює різні перетворення в круговороті речовин у водоймах і є початковою ланкою в харчовому ланцюзі харчування риб.
Патогенні мікроби потрапляють в річки і водойми зі стічними водами. Збудники таких кишкових інфекцій, як черевний тиф, паратифи, дизентерія, холера та ін., Можуть зберігатися у воді тривалий час. В цьому випадку вода стає джерелом інфекційних захворювань.
Особливо небезпечне потрапляння хвороботворних мікробів в водопровідну мережу. Тому за станом водойм і подається з них водопровідної води встановлений сани-тарно-бактеріологічний контроль.
Санітарно-мікробіологіческнй аналіз питної
Відбір проби води
Для відбору проб води використовують спеціально призначену для цих цілей одноразовий посуд або ємності багаторазового застосування, виготовлені з матеріалів, які не впливають на життєдіяльність мікроорганізмів. Ємності повинні бути оснащені щільно закриваються (силіконовими, гумовими або з інших матеріалів) пробками і захисним ковпачком (з алюмінієвої фольги, щільного паперу). Багаторазовий посуд, в тому числі пробки, повинні витримувати стерилізацію сухим жаром або автокла-вірованіем.
Пробу відбирають у стерильні ємності з дотриманням правил стерильності. Ємність відкривають безпосередньо перед відбором, видаляючи пробку разом із стерильним ковпачком. Під час відбору пробка і краю ємності не повинні чогось стосуватися. Обполіскувати посуд забороняється.
При дослідженні води з розподільних мереж відбір проб з крана проводять після попередньої його стерилізації обпаленням і подальшого спуску води не менше 10 хвилин при повністю відкритому крані. Якщо відбирають воду після знезараження хімічними реагентами, то для нейтралізації залишкової кількості дезінфектан-та в ємність, призначену для відбору проб, до стерилізації вносять натрій серноватистокислого у вигляді кристалів або концентрованого розчину з розрахунку 10 мг на 500 мл води.
Після наповнення ємність закривають стерильною пробкою і ковпачком. Відібрану пробу маркують і супроводжують актом відбору проб води із зазначенням назвою проби, місця забору, дати (рік, місяць, число, час), мета дослідження, куди направляється проба для дослідження, підпис особи, яка взяла пробу.
Безпека питної води за епідеміологічними показниками (по СанПіН 2.1.4.559-96)
показники
Одиниці виміру
нормативи
Термотолерантні коліформні бактерії
Число бактерій в 100 мл
відсутність
Загальні коліформні бактерії
Число бактерій в 100 мл
відсутність
Загальне мікробне число
Число утворюють колоній бактерій в 1 мл
Не більше 50
коліфаги
Число бляшкообразующіх-чих одиниць в 100 мл
відсутність
Спори сульфітреду-цірующіх клост-рідій
Число спор в 20 мл
відсутність
цисти лямблій
Число цист в 50 мл
відсутність
Зберігання та транспортування проб води
До дослідження проб в лабораторії необхідно приступити якомога швидше з моменту відбору.
Доставка проб здійснюється в контейнерах-холодильниках при температурі 4-10 ° С. У холодний період року контейнери повинні бути забезпечені термоизолирующими матеріалами, що забезпечують запобігання проб від промерзання. При дотриманні зазначених умов термін початку досліджень від моменту відбору проб не повинен перевищувати 6 годин.
Якщо проби не можна охолодити, їх аналіз слід провести протягом 2 годин після забору.
При недотриманні часу доставки проби і температури зберігання аналіз проводити не слід.
Підготовка посуду до аналізу
Лабораторний посуд повинна бути ретельно вимита, обполоснути дистильованої водою до повного видалення миючих засобів та інших сторонніх домішок і висушена.
Пробірки, колби, пляшки, флакони повинні бути заткнуті силіконовими або ватно-марлевими пробками і упа- ковані так, щоб виключити забруднення після стерилізації в процесі роботи і зберігання. Ковпачки можуть бути металеві, силіконові, з фольги або щільного паперу.
Нові гумові пробки кип`ятять в 2% -му розчині натрію двовуглекислого 30 хвилин і 5 разів промивають водопровідною водою (кип`ятіння і промивання повторюють двічі). Потім пробки 30 хвилин кип`ятять в дистильованої воді, висушують, загортають у папір або фольгу і стерилізують в паровому стерилізаторі. Гумові пробки, використані раніше, знезаражують, кип`ятять 30 хвилин у водопровідній воді з нейтральним миючим засобом, промивають у водопровідній воді, висушують, монтують і стерилізують.
Піпетки зі вставленими тампонами з вати повинні бути покладені в металеві пенали або загорнуті в папір.
Чашки Петрі в закритому стані повинні бути покладені в металеві пенали або загорнуті в папір.
Підготовлений посуд стерилізують в сухожарові шафі при 160-170 ° С 1 годину, вважаючи з моменту досягнення зазначеної температури. Простерилізованих посуд можна виймати з сушильної шафи тільки після його охолодження нижче 60 ° С.
Після виконання аналізу всі використані чашки і пробірки знезаражують в автоклаві при (126 ± 2) ° С 60 хвилин. Піпетки знезаражують кип`ятінням в 2% -му розчині NaHC03.
Після охолодження видаляють залишки середовищ, потім чашки і пробірки замочують, кип`ятять у водопровідній воді і миють з подальшим ополіскуванням дистильованою водою.
Підготовка проб води
Перш ніж приступити до посіву, пробу необхідно ретельно перемішати і обробити палаючим тампоном край ємності з тим, щоб усунути його можливе забруднення під час транспортування. На використовуваних для посіву пробірках і чашках необхідно позначити номер проби, обсяг води або розбавлення, дату посіву.
Перед кожним відбором нової порції води для аналізу пробу необхідно перемішати стерильною піпеткою.
Визначення коліформних бактерій у воді методом мембранних фільтрів
Фільтрувальний апарат обтирають ватяним тампоном, змоченим спиртом, і фламбіруйте. Після охолодження на нижню частину фільтрувального апарату (столик) Фламбе-ванням пінцетом кладуть стерильний мембранний фільтр, притискують його верхньою частиною приладу (склянкою, лійкою) і закріплюють пристроєм, передбаченим конструкцією приладу.
У верхню частину приладу наливають точно відміряний об`єм води, потім створюють вакуум в нижній частині приладу.
При фільтруванні 1 мл досліджуваної води або її розведенні в воронку попередньо слід налити не менше 10 мл стерильної водопровідної води, а потім внести анализируемую воду.
Після закінчення фільтрування лійку знімають, флам-бірованним пінцетом фільтр обережно піднімають за край при збереженні вакууму для видалення надлишку води на нижньому боці фільтра, а потім переносять його, не перегортаючи, на живильне середовище, розлиту в чашки Петрі, уникаючи бульбашок повітря між середовищем і фільтром. Поверхня фільтра з осілими на ній бактеріями повинна бути звернена вгору.
На одну чашку можна помістити 3-4 фільтра з умовою, щоб фільтри не стикалися.
виконання аналізу
При дослідженні води на виході з водопровідних споруд і в розподільній мережі необхідно аналізувати 3 обсягу по 100 мл. Точно відміряний об`єм води фільтрують через мембранні фільтри з дотриманням вищевказаних вимог.
Фільтри поміщають на середовище Ендо, ставлять в термостат догори дном і інкубують посіви при температурі (37 + 1) ° С протягом 24 + 2 годин.
облік результатів
Результат вважається негативним, якщо на фільтрах взагалі не виросли колонії або виросли колонії з нерівними краями і поверхнею (плівчасті, губчасті, плісняві, прозорі, слизові).
При зливному зростанні на всіх фільтрах проводять розсівання на середовищі Ендо для отримання ізольованих колоній звичайними бактеріологічними методами.
При наявності типових лактозопозитивних колоній, що дають відбиток на зворотному боці мембранного фільтру і середовищі - темно-червоних, червоні з металевим блиском і без нього, а також лактозоотріцательних - рожевих без відбитків, підраховують число колоній кожного типу.
Для ідентифікації відбирають не менше 5 колоній кожного виду, роблять їх посів на скошений агар і далі вивчають біохімічні тести. В якості підтверджуючих використовують оксидазний тест і тест утворення кислоти і газу при ферментації лактози або маніту (глюкози).
Для визначення оксвдазной активності на фільтрувальну папір треба помістити 2-3 краплі свіжоприготованого реактиву для океідазного тесту. Заздалегідь приготовані папірці змочують дистильованою водою. Скляною паличкою поміщають мазок свіжої культури на підготовлену папір. Реакція вважається позитивною, якщо протягом 10-30 с з`являється фіолетово-коричневе або синє забарвлення.
Культури, що дали оксидазопозитивних реакції, подальшому дослідженню не підлягають, так як до загальних коліформні бактеріям відносяться грамнегативні, не утворюють спор палички, що не володіють оксидазної активністю, ферментують лактозу або маніт з утворенням альдегіду, кислоти і газу при температурі 37 ° С протягом 24 годин .
Термотолерантні коліформні бактерії є показниками свіжого фекального забруднення і мають всі ознаки загальних коліформних бактерій, які крім того здатні ферментувати лактозу до кислоти і газу при температурі 44 ° С протягом 24 годин.
Всі типові лактозопозитивні колонії засівають в підтверджують середовища з лактозою і манітом і інкубують протягом 24 годин при температурі 37 ° С для визначення загальних коліформних бактерій.
Для визначення термотолерантних бактерій посів виробляють в середу, попередньо прогріту до температури 44 ° С, і інкубують при цій же температурі протягом 24 годин.
Колонії враховують як загальні коліформні бактерії при негативному оксидазний тесті, ферментації лактози або маніту (глюкози) при температурі 37 ° С з утворенням кислоти і газу. Серед цих колоній враховують як термотолерантні коліформні бактерії при оксидазний тесті і ферментації лактози при температурі 44 ° С з утворенням кислоти і газу.
Якщо при вибірковій перевірці колоній одного типу отримані неоднакові результати, то для обчислення числа коліформних бактерій серед цих колоній використовують формулу:
де х - число колоній одного типу-а - загальне число колоній цього типу-b - число перевірених з них- з - число колоній з позитивним результатом.
Обчислення та представлення результатів
Результат аналізу виражають числом колоній утворюючих одиниць (КУО) загальних коліформних бактерій в 100 мл води. Для підрахунку результату підсумовують число колоній, підтверджених як загальні коліформні бактерії, що виросли на всіх фільтрах, і ділять на 3.
Приклади. При посіві трьох фільтрів по 100 мл виросло дві колонії на одному, на інших двох фільтрах немає зростання. Число загальних коліформних бактерій буде: 2: 3 = = 0,7 КУО в 100 мл.
Визначення загального числа мікроорганізмів, що утворюють колонії на поживному агарі
Метод визначає в питній воді загальне число мезо-профільними аеробних і факультативно анаеробних мікроорганізмів (ОМЧ), здатних утворювати колонії на поживному агарі при температурі 37 ° С протягом 24 годин, видимі зі збільшенням в 2 рази.
виконання аналізу
З кожної проби відібраної води повинен бути зроблений посів не менше двох об`ємів по 1 мл. Після ретельного перемішування проби води вносять по 1 мл в стерильні чашки Петрі, відразу ж в кожну чашку вливають 6-8 мл розплавленого і охолодженого до 45-46 ° С поживного агару. Потім змішують вміст чашок, рівномірно розподіляючи по всьому дну, уникаючи утворення бульбашок повітря, попадання агару на краю і кришку чашки.
Після застигання агару чашки з посівами поміщають в термостат при температурі 37 ° С на 24 години.
Обчислення та представлення результатів
Повинні бути підраховані всі виросли на чашці колонії, які спостерігаються при збільшенні в 2 рази. Підрахунок слід проводити тільки на тих чашках, на яких виросло не більше 300 ізольованих колоній.
Підрахована кількість колоній на кожній чашці підсумовують і ділять на два. Результат виражають числом колоній утворюючих одиниць (КУО) в 1 мл досліджуваної проби води.
Визначення загальних і термотолерантних коліформних бактерій титраційна методом
Тітраціонний метод може бути використаний:
при відсутності матеріалів і обладнання, необхідних для виконання аналізу методом мембранної фільтраціі- при аналізі води з великим вмістом зважених речовин-
* В разі переважання у воді сторонньої мікрофлори, що перешкоджає отриманню на фільтрах ізольованих колоній загальних коліформних бактерій.
виконання аналізу
При дослідженні питної води централізованого водопостачання засівають 3 обсягу по 100 мл (аналіз якісний). При дослідженнях води з метою кількісного визначення загальних коліформних бактерій і при повторному аналізі проводять посів: 3 обсягів по 100 мл, 3 обсягів по 10 мл, 3 обсягів по 1 мл. Кожен обсяг досліджуваної води засівають у лактозо-пептонную середу. Посів 100 мл і 10 мл води виробляють в 10 і 1 мл концентрованої лак-Тозо-пептонною середовища, посів 1 мл проби проводять в 10 мл середовища звичайної концентрації.
Посіви інкубують при температурі 37 ° С протягом 24- 48 годин. Після 24 годин інкубації проводять попередню оцінку посівів. З ємностей, де зазначено наявність росту і утворення газу, проводять висів на сектора типових для лактозопозитивних бактерій колоній, дають позитивну відповідь на присутність загальних коліформних бактерій.
обчислення результатів
При дослідженні трьох обсягів по 100мл результати оцінюються якісно, і при виявленні загальних або термотолерантних коліформних бактерій хоча б в одному з трьох об`ємів роблять запис у протоколі «виявлені» в 100 мл.
При дослідженні кількісним методом, після визначення позитивних і негативних результатів на наявність загальних і термотолерантних коліформних бактерій в обсягах води, посіяних в середу накопичення, обчислюють найбільш ймовірне число бактерій в 100 мл проби (таблиця).
Розрахунок найбільш ймовірного числа бактерій в 100 мл питної води
Визначення коліфагів прямим методом
проведення аналізу
Напередодні проведення аналізу необхідно зробити посів Е. coli на косяк з поживним агаром.
Перед проведенням аналізу зробити змив бактерій з цього косяка 5 мл стерильної водопровідної води і по стандарту мутності приготувати суспензію Е, coli в концентрації 109 бактеріальних клітин в 1 мл.
Розплавити і остудити до 45 ° С 2% -й живильний агар.
Досліджувану воду (100 мл) внести в 5 стерильних чашок Петрі по 20 мл в кожну. В живильний агар додати змив Е. coli з розрахунку 1,5 мл змиву бактерій на 150 мл агару і обережно перемішати. Отриманою сумішшю по 30 мл залити спочатку порожню чашку Петрі (контроль газону Е. coli), а потім все чашки, що містять досліджувану воду. Вміст чашок обережно перемішати. Чашки залишити при кімнатній температурі для застигання, а потім догори дном помістити в термостат для інкубації при температурі 37 ° С.
облік результатів
Облік результатів проводять шляхом підрахунку і підсумовування бляшок, які виросли на 5 чашках Петрі. Результати виражають в бляшкообразующіх одиницях (БОЮ) на 100 мл проби води. У контрольній чашці бляшки коліфагів повинні бути відсутніми.
Для проведення поточного контролю якості питної води використовують метод визначення коліфагів.
Коліфаги - бактеріальні віруси, здатні лізуючого-вать Е. coli і формувати при температурі 37 + 1 ° С через 18 + 2 г зони лізису бактеріального газону (бляшки) на живильному агарі.
Досліджувану пробу води (100 мл) і чашку Петрі з контролем Е. coli поміщають в термостат на 18-20 годин при температурі 37 + 1 ° С.
Для контролю культури 0,1 мл змиву бактерій Е. coli (або 0,2 мл 4-годинний бульонной культури) поміщають в чашку Петрі і заливають живильним агаром.
Після інкубації з досліджуваної проби води в пробірку відливають 10 мл і додають 1 мл хлороформу. Пробірку закривають стерильною гумовою або силіконової пробкою, енергійно струшують і залишають при кімнатній температурі не менше 15 хв до повного осадження хлороформу.
У попередньо розплавлений і охолоджений до 45 49 ° С живильний агар додають приготовлений змив бактерій Е. coli з розрахунку 1,0 мл змиву на 100 мл агару,
У стерильну чашку Петрі піпеткою з пробірки переносять 1 мл обробленої хлороформом проби і заливають сумішшю розплавленого і охолодженого до 45-49 ° С поживного агару об`ємом 12-15 мл, а також одну додаткову чашку Петрі для контролю культури Е. coli, перемішують і залишають на столі до повного застигання агару, потім чашки Петрі ставлять в термостат на 18 + 2 ч при 37 ° С.
облік результатів
Перегляд посівів здійснюють в прохідному світлі. Проба вважається позитивною при наявності повного лізису, просвітлення декількох бляшок, однією бляшки на чашці з пробою води при відсутності зон лізису на контрольній чашці. При наявності зон лізису в контролі - результат вважається недійсним.
Поділитися в соц мережах:
Схожі
