Практична частина
Підготовка до стерилізації лабораторного посуду1. Перед стерилізацією лабораторний посуд ретельно миють і сушать.
2. Пробірки, флакони, пляшки, матраци, колби закривають ватно-марлевими пробками. Поверх пробки на кожній посудині (крім пробірок) надягають паперовий ковпачок.
3. Чашки Петрі стерилізують загорнутими в папір по 1 5 штук або в пеналах.
4. Пастерівські піпетки по 3-5-10-15 штук загортають в щільну обгортковий папір. У верхню частину кожної піпетки вкладають шматочок вати. Під час роботи піпетки з пакета виймають за верхній кінець.
Лабораторний посуд стерилізують:
а) сухим жаром при температурі 150, 160 і 180 ° С відповідно 2 години, 1 годину і 30 хвилин.
б) в автоклаві при тиску 1 атм. протягом 20-30 хвилин.
Стерилізація металевих інструментів
Ножиці, скальпелі, пінцети та ін. Стерилізують в 2% содовому розчині (сода попереджає поява іржі і втрату гостроти). Леза скальпелів і ножиць перед зануренням у воду рекомендується обгортати ватою.
Стерилізація рукавичок та інших гумових виробів
Рукавички, шланги, трубки та інші, забруднені вегетативною формою мікробів, стерилізують кип`ятінням в 2% розчині соди або текучою парою 30 хвилин-при забрудненні спороносной патогенною мікрофлорою - в автоклаві при тиску 1 атм. протягом 30 хвилин.
Приготування дезрастворов групи хлору
1. Вапно має високий бактеріальним дією. Її використовують в мікробіологічній практиці у вигляді порошку, 10-20% хлорно-вапняного молока і 0,2-10% освітленого розчину.
2. Схема приготування хлорно-вапняного молока.
Концентрація хлорно-нзвсстко-вого молока (в%)
Кількість хлорного вапна в грамах на 10 л води при вмісті в ній активного хлору (в%)
У таблиці показано взаємозв`язок між вмістом активного хлору в хлорного вапна і її кількістю, необхідною для приготування 10 л хлорно-вапняного молока 10-20% концентрації.
3. Хлорамін - містить 25-26,5% активного хлору.
У мікробіологічних лабораторіях користуються 0,2 10% розчинами хлораміну.
Концентрація розчину (в%)
Кількість хлораміну в 1 г на:
Приготування маточного розчину хлорного вапна
1. Взяти ємність (скляні бутилі темного скла з притертою пробкою, емальований або скляний посуд) і помістити в неї 1 кг сухого хлорного вапна, після чого, продовжуючи помішувати, додати поступово невелику кількість води до отримання кашкоподібної маси. І потім, перемішуючи, додати воду до об`єму 10 літрів, т. Е. Для приготування 10% розчину хлорного вапна необхідно взяти: 1 кг сухого хлорного вапна + 9 літрів води = = 10 літрам розчину.
2. Свіжоприготовані розчини залишають на 24 години в прохолодному темному приміщенні в закритому посуді. Через 24 години обережно, не збовтуючи осаду, зливають освітлений розчин в іншу ємність (скляні ємності темного кольору, емальований або пластмасовий посуд) для зберігання до 10 днів.
3. При приготуванні маточного розчину на ємності (на етикетці, яка кріпиться на ній) вказується дата приготування, концентрація розчину, посаду, прізвище особи, приготував розчин.
Увага! Використання оцинкованого посуду заборонено. Дезрозчини групи фенолу
1. Карболова кислота. Рідка карболова кислота містить 90% кристалічного фенолу і 10% води. У мікробіологічних лабораторіях використовують 3-5% розчини карболової кислоти.
Схема приготування розчинів карболової кислоти
2. Хромова суміш. Пропис приготування:
В колбу наливають 150 мл концентрованої сірчаної кислоти, туди ж всипають 25 г двухромовокислого калію. Отриману суміш залишають стояти до розчинення. Через добу розчин темно-оранжевого кольору може бути застосований для миття посуду. Перед вживанням суміш треба підігріти до 45-50 ° С. Якщо колір суміші змінюється на темно-зелений, це говорить про її непридатність.
Виділення бактеріофага з патологічного матеріалу
Досліджувану рідину фільтрують від мікробів.
Твердий досліджуваний матеріал (грунт, харчові продукти, оформлені випорожнення) подрібнюють в ступці, емульгують, фільтрують. Наявність фага в отриманому фільтраті визначають в рідких поживних середовищах або на щільних середовищах за методом Отто або Граціа.
Виявлення бактеріофага на щільних поживних середовищах за методом Отто
1,5% МПА розливають в чашки Петрі (більш висока концентрація агару пригнічує розвиток колоній бактеріофага). Після застигання МПА засівають 16-18-годинний бульонной культурою бактерій, гомологічних шуканого фагу. Для отримання суцільного зростання посів розтирають шпателем. Через 5-10 хв після посіву на підсушену поверхню краплями наносять досліджуваний фільтрат. Чашки ставлять в термостат на 18-24 години при температурі 37 ° С.
Немає результатів: доказом наявності бактеріофага служить повна відсутність зростання культури в місці попадання краплі фільтрату (активний бактеріофаг) або поява в цьому місці дрібних стерильних плям-колоній бактеріофага (бактеріофаг слабкої активності).
Техніка фаготшшрованія мікробів за методом Креджі і Єнсена
В основу фаготипирования покладено принцип спільного вирощування тіпіруемой культури з типовим бактериофагом. Наступ лізису визначає типову приналежність бактерій. Для фаготипирования бактерій застосовують 1,5% МПА з 5% гліцерину. Пророщену бульонную культуру краплями наносять на поверхню живильного середовища. Краплі не повинні розтікатися. Вони повинні вбратися протягом 3-10 хв.
Потім на поверхню кожної краплі наносять по 1 краплі типового фага з таким розрахунком, щоб частина культури залишалася вільною від впливу бактеріофага (для контролю росту культури). Чашки поміщають в термостат при температурі 37 ° С: через 6-8 годин виконують облік результатів фаготипирования.
Наявність добре вираженого лізису досліджуваної культури з одним з типових фагів вказує на приналежність культури до даного фаготип.
Додаток 7.4 (обов`язковий)
СП 1.2.731-99
Засоби і методи дезінфекції, що використовуються при роботі з мікроорганізмами III-IV груп патогенності
I. Бактерії, що не утворюють спор
1. Хлорамін Б або ХБ (вміст активного хлору - АХ не менше 26%):
0,5%, 1%, 2%, 3% -е (по препарату) розчини.
2. Вапно (вміст АХ не менше 25%):
сухе речовина
0,5%, 1%, 2% -е (по препарату) освітлені раствори-
10% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені раствори-
20% -й (по препарату) хлорно-вапняне молоко.
3. Вапно белільной термостійкий (вміст АХ не менше 25%):
сухе речовина
0,5%, 1%, 2% -е (по препарату) освітлені раствори-
10% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
4. Нейтральний гіпохлорит кальцію - НГК (вміст АХ не менше 52% для марки А і не менше 24% для марки Б):
сухе речовина
0,15% -й (за активним хлором) раствор-
0,25%, 0,5%, 1% -е (за активним хлором) прояснені раствори-
5% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
5. Гіпохлорит кальцію технічний - ГКТ (вміст АХ не менше 35%):
сухе речовина
1%, 1,5% -е (по препарату) освітлені раствори-
5% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
6. Двутретьосновная сіль гіпохлориту кальцію - ДТС ГК (вміст АХ не менше 47%):
сухе речовина
0,25%, 0,5%, 1% -е (по препарату) освітлені раствори-
5% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
7. двуосновних сіль гіпохлориту кальцію - ДСГК (вміст АХ не менше 30%):
сухе речовина
1% -й (по препарату) освітлений раствор-
5% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
8. Гіпохлорит натрію (вміст АХ не менше 14%):
1% -й (за активним хлором) розчин.
9. Гіпохлорит натрію, одержуваний методом електролізу кухонної солі на установках, дозволених до виробництва і застосування 0,125%, 0,25% -е (за активним хлором) розчини.
10. анолітов, одержувані на установках, дозволених до виробництва і застосування:
з вмістом 0,03%, 0,05%, 0,06% АХ.
11. Спорокс (вміст АХ не менше 2,5%):
2%, 5% -е (по препарату) розчини.
12. ДП-2 (зміст АХ не менше 40%)
0,1%, 0,2% -е (по препарату) розчини. 13.Дезоксон-1 або дезоксон-4 (зміст надуксусной кислоти - НУ До не менш 5%):
1%, 2% -е (по препарату) розчини.
14. Пергідроль (зміст перекису водню 30-35%):
3% -й (по ДВ) розчин перекису водорода-
3% -й (по ДВ) розчин перекису водню з 0,5% миючого засобу ( «Прогрес», «Новина», «Астра», «Лотос») -
6% -й (по ДВ) розчин перекису водню.
15. ПВК (зміст перекису водню не менше 30%):
0,5%, 0,75%, 2% -е (по перекису водню) розчини.
16. Пероксімед (зміст перекису водню 30% і ПАР):
3% -й (по перекису водню) розчин.
17. Пероксогідрат фториду калію - ПФК-1 (зміст перекису водню не менше 30%):
3%, 6%, 7%, 9% -е (по препарату) розчини.
18. полісепт (зміст полігексаметиленгуанідину хлориду 25%):
1% -й (за препаратом) розчин.
19. Демос (містить комплекс катіонних і ін. ПАР):
5%, 10% -е (по препарату) розчини.
20. Велтолен (зміст клатрата сечовини з дідецілді-метіламмоній броміду 20%):
1% -й (за препаратом) розчин.
21. Фогуцід (зміст підлогу ігексаметіленгуанідіна фосфату 19-25%):
0,5-1% -е (по ДВ) розчини.
22. Ніка-екстра М (вміст алкілдіметіл бензил амоній хлориду 3,5-4,5%):
0,5%, 2% -е (по препарату) розчини.
23. Лізол А (вміст фенолів 50%):
5% -й (за препаратом) розчин.
24. 1-хлор-р-нафтол:
0,5%, 2% -е (по препарату) розчини.
25. Їдкий натр:
10% -й (за препаратом) розчин.
26. Аламінол (містить катамін АБ, гліоксаль і ін.):
1% -й (за препаратом) розчин.
27. Біанол (містить глутаровий альдегід, гліоксаль і ка-Таміно АБ):
1,5% -й (за препаратом) розчин.
28. Глутарал або Глутарал Н (зміст глутарового альдегіду 2%):
готове до застосування засіб.
29. Формалін:
3%, 10%, 20%, 40% -е (по формальдегіду) водні розчини.
30. Аміак 25% (по ДВ) водний розчин.
Для нейтралізації формальдегіду застосовується співвідношення 1: 1.
31.Діхлор-1, Білка, Блиск, Блиск-2, Саніта, Дезус і ін. Побутові чистяще-дезінфікуючі засоби: пасти, порошки та ін. Форми.
32. Кип`ятіння:
2% -й розчин харчової соди-
2% -й розчин кальцинованої соди.
33. Обробка водяним насиченим паром під тиском (автоклавування).
34. Етиловий спирт 70%, 96% -е, суміш Нікіфорова.
35. Обробка гарячим повітрям - 180 ° С.
36. Спалювання.
37. Прожарювання.
38. Обробка в дезінфекційних камерах: пароповітряний, пароформаліновою методи.
39. Аерозольний метод знезараження.
40. Газовий метод (дезінфекція парами формальдегіду).
41. Ультрафіолетове опромінення.
II. мікобактерії
1. Хлорамін Б або ХБ (вміст АХ не менше 26%):
5% -й (по препарату) раствор-
0,5% і 1% -е (за активним хлором) активовані розчини.
2. Вапно (вміст АХ не менше 25%):
сухе речовина
2-10% -е (по препарату) раствори-
20% -й (по препарату) хлорно-вапняне молоко-
0,25 0,5% -е (за активним хлором) активовані розчини.
3. Вапно белільной термостійкий (вміст АХ не менше 25%):
сухе речовина
2-10% -е (по препарату) раствори-
0,25-0,5% -е (за активним хлором) активовані розчини.
4. Двутретьосновная сіль гіпохлориту кальцію - ДТС ГК (вміст АХ не менше 47%):
сухе речовина
20% -ве хлорно-вапняне молоко-
1% -й (за препаратом) розчин.
5. двуосновних сіль гіпохлориту кальцію - ДСГК (вміст АХ не менше 30%):
суху речовину.
6. Нейтральний гіпохлорит кальцію - НГК (вміст АХ не менше 52% для марки А і не менше 24% для марки Б):
сухе речовина
1%, 5% -й (за активним хлором) розчин.
7. Гіпохлорит кальцію технічний - ГКТ (вміст АХ не менше 35%):
сухе речовина
2% -й (за препаратом) розчин.
8. Гіпохлорит натрію, одержуваний методом електролізу на установках, дозволених до виробництва і застосування:
0,25%, 0,5% -е (за активним хлором) розчини.
9. анолітов, одержувані на установках, дозволених до виробництва і застосування з вмістом 0,05,0,09% АХ.
10. Спорокс (вміст АХ не менше 2,5%):
10% -й (за препаратом) розчин.
11. ДП-2 (зміст АХ не менше 35%):
сухе речовина
0,5% -й (за препаратом) розчин.
12. Дезоксон-1 або Дезоксон-4 (зміст надуксусной кислоти - НУК не менше 5%):
0,25%, 0,5%, 1% -е (по НУК) розчини.
13. Пергідроль (зміст перекису водню - ПВ - не менше 30%):
3% -й розчин.
14. Пероксімед (зміст ПВ не менше 30% і миючі компоненти):
3 і 4% -е (по ПВ) розчини.
15. ПВК (зміст ПВ не менше 30%):
2,5% -й (по ПВ) розчин.
16. Лізол марки А (вміст фенолів 50%):
5% -й розчин.
17. 1-хлор-р-нафтол:
0,5% -й (за препаратом) розчин.
18. Глутарал або Глутарал Н (зміст глутарового альдегіду 2%):
готове до застосування засіб.
19. Аламінол (містить катамін АБ, гліоксаль і ін.):
1% -й (за препаратом) розчин.
20. Біанол (містить глутаровий альдегід, гліоксаль і катамін АБ):
1,5% -й (за препаратом) розчин.
21. Кип`ятіння:
2% -й розчин харчової соди-
2% -й розчин кальцинованої соди.
22. Обробка водяним насиченим паром.
23. Обробка гарячим повітрям - 180 ° С.
24. Спалювання.
25. Прожарювання.
26. Обробка в дезінфекційних камерах: пароповітряний, пароформаліновою методи.
27. Ультрафіолетове опромінення.
Ш. Бактерії, що утворюють спори
1. Хлорамін Б або ХБ (вміст АХ не менше 26%):
1-4% -е активовані розчини, які містять 0,25 1% АХ.
2. Вапно або белільной термостійкий вапно (вміст АХ не менше 25%):
сухе речовина
20% -й освітлений і неосвітлений розчин, що містить не менше 5% АХ-
4% -й освітлений активований розчин, що містить не менше 1% АХ.
3. Нейтральний гіпохлорит кальцію - НГК (вміст АХ не менше 52%):
сухе речовина
15% -й освітлений розчин, що містить не менше 5% АХ-
2% -й освітлений активований розчин, що містить не менше 1% АХ.
4. Двутретьосновная сіль гіпохлориту кальцію - ДТЗ, ГК (вміст АХ не менше 47%):
сухе речовина
15% -й освітлений розчин, що містить не менше 5% АХ-
2% -й освітлений активований розчин, що містить не менше 1% АХ.
5. двуосновних сіль гіпохлориту кальцію - ДСГК (вміст АХ не менше 30%):
сухе речовина
4% -й активований розчин, що містить не менше 1,2% АХ.
6. Їдкий натр:
10% -й розчин (70 ° С).
7. Пергідроль, що містить 30-35% перекису водню (ПВ):
6% -й розчин ПВ з 0,5% миючого засобу ( «Прогрес», «Новина», «Астра», «Лотос») -
3% -й розчин ПВ з 0,5% миючого засобу при температурі розчину 50 ° С.
8. ПВК (зміст ПВ не менше 30%):
розчин, що містить 4% ПВ при температурі 20 ° С розчин, що містить 3% ПВ при температурі 50 ° С.
9. Пероксімед (зміст ПВ 30% і ПАР):
3% -й (по ПВ) розчин при температурі 20 і 50 ° С
6% -й (по ПВ) розчин.
10. Дезоксон-1 або дезоксон-4 (зміст ПУК не менше розчин, що містить 1% надуксусной кислоти (НУ К).
11. Формалін:
20%, 40% -е (по формальдегіду) водні раствори-
0, 2% -й розчин формальдегіду з 0,2% мила або ОП-10 при температурі 60 ° С.
12. Кип`ятіння.
13. Прожарювання.
14. Спалювання.
15. Сухе гаряче повітря.
16. Обробка паром під тиском.
17. Всі ємності, в яких проводиться знезараження, повинні бути закриті кришкою.
18. Обробка в камерах: пароповітряний і пароформалі-1 новий методи.
19. Аерозольний метод знезараження.
ПИТАННЯ для самоконтролю
Які фізичні фактори впливають на клітину? Що таке «антисептика» і «асептика»? Які ви знаєте «антисептики»? Що таке «симбіоз», «метабіозу» і «антагонізм»? Що таке «стерилізація»? Назвіть фізичні методи «стерилізації». Де застосовується хімічна і механічна стерилізація?
Що таке «бактеріофаг»? Структура і морфологія фагів. Як використовуються фаги в медицині?
Поділитися в соц мережах:
Схожі
