Лабораторна діагностика онихомикозов

Ця глава написана не для співробітників лабораторій, а для лікуючих оніхомікози лікарів, які направляють матеріал в лабораторії. Тут дано вказівки, як збирати матеріал для дослідження, і описано, що представляють собою ці дослідження. Лікар повинен знати, чого він вимагає від лабораторії і які відомості і коли вона може йому надати.

Мікробіологічне дослідження матеріалу, взятого з уражених нігтів, має встановити, по-перше, інфекційну природу захворювання і показати, що збудник - гриб і, по-друге, вид або хоча б рід цього гриба. Перше завдання вирішується майже завжди успішно, для цього потрібно лише мікроскопічне дослідження матеріалу. Друге завдання вирішується рідко і з успіхом не більше ніж в половині випадків. Для встановлення виду збудника потрібно посів матеріалу на живильне середовище з наступною ідентифікацією виділеної культури. Ці методи складніше, ніж звичайна мікроскопія, і займають чимало часу. Разом з тим тільки встановлення виду збудника, отриманого в культурі, дозволить визначити етіологію оніхомікозу. Знання етіології визначає вибір системного протигрибкового засобу, тому системне лікування краще не починати, не дочекавшись відповіді лабораторії. Однак відповідь дають далеко не завжди. Винним в цьому часто виявляється лікар.

збір матеріалу

Правильний збір матеріалу з уражених нігтів - запорука успішного мікробіологічного дослідження. Забираючи матеріал, не завжди захоплюють ділянки нігтя, що містять життєздатні гриби. Нежиттєздатні гриби в культурі, природно, не виростуть, і їх вид встановити не вдасться.

Ділянка нігтя, який треба взяти, визначається формою онихомикоза. Так, при поверхневій формі оніхомікозу слід робити зіскрібки з поверхні нігтьової пластинки. При найпоширенішою дистальної подногтевой формі найбільш життєздатні гриби розташовуються під нігтьової платівкою. Матеріал, який направляють на дослідження, повинен включати не тільки обрізок нігтьової пластинки, але і зішкріб з нігтьового ложа, з-під пластинки. Крім того, слід захоплювати і області незмінного нігтя, оскільки на кордоні між ними і ураженими ділянками нігтя розташовуються найактивніші гриби. При проксимальній подногтевой формі брати матеріал важко. У цих випадках іноді, особливо якщо збираються проводити гістологічне дослідження або диференціальну діагностику, роблять біопсію нігтя, зрідка використовують бормашину. При пароніхія роблять зіскрібки з проксимального валика і з-під нього. У всіх випадках, щоб уникнути бактеріальної контамінації, перед взяттям зразка слід обробити ніготь етиловим спиртом.

мікроскопія

Матеріал обробляють 10-30% розчином їдкого калі, щоб розчинити кератин, і вивчають під світловим мікроскопом. Щоб краще було видно частини міцелію цвілевих грибів, іноді до розчину їдкого калі додають чорнило. При мікроскопії виявляють ниткоподібні гіфи грибів або почкующиеся клітини (рис. 3.2.1). Таким чином, мікроскопія дає висновок тільки про грибкової природи інфекції, але не про вид гриба-збудника. Звичайно, результативність мікроскопічного дослідження залежить від кваліфікації співробітника лабораторії.

Мал. 3.2.1.

Мікроскопія соскоба з нігтів, уражених Т. rubrum. Видно гіфи гриба

.



Культура

Проводять посів матеріалу на стандартну середу Сабуро, часто з добавками антибіотиків. В діагностиці Дерматофітние інфекцій прийнято додавати в середу Сабуро циклогексимид, що пригнічує ріст грибів-контамінантів, що потрапляють з повітря. Існують готові комерційні середовища з добавками антибіотиків і циклогексаміду. Слід пам`ятати, що багато цвілеві гриби-недерматофіти і деякі види Candida не ростуть на середовищі з циклогексимідом, тому рекомендується робити посів на середовище Сабуро з циклогексимідом і на середу без нього. Ідентифікацію видів зазвичай проводять при мікроскопічному дослідженні виросла культури або шляхом пересіву на селективні середовища (рис. 3.2.2-3.2.15).

Мал. 3.2.2.

Культура гриба Т. rubrum, виділеного з уражених нігтів

. Отримано на середовищі Сабуро (зліва) і кукурудзяному агарі (праворуч).

Відео: Лабораторна діагностика інвазивних мікозів

Мал. 3.2.3.

Культура гриба Т. mentagrophytes var. interdigitale, виділеного з уражених нігтів

. Отримано на середовищі Сабуро.

Мал. 3.2.4.

Культура гриба Candida albicans

. Отримано на середовищі Сабуро.

Мал. 3.2.5.

Культура гриба Torulopsis glabrata, виділеного з уражених нігтів

. Отримано на середовищі Сабуро.

Мал. 3.2.7.

Мікроморфологія Acremonium sp., Виділеного з уражених нігтів

.

Відео: Лабораторна діагностика

Мал. 3.2.6.

Культура гриба Ulocladium sp., Виділеного з уражених нігтів

.

Мал. 3.2.8.

Мікроморфологія Fusarium sp., Вьщеленного з уражених нігтів

.

Мал. 3.2.9.

Мікроморфологія Scopulariopsis sp., Виділеного з уражених нігтів

.

Мал. 3.2.10.

Мікроморфологія Candida albicans, виділеного з уражених нігтів

.

Мал. 3.2.11.

Мікроморфологія Altemaria sp., Виділеного з уражених нігтів

.

Мал. 3.2.12.

Мікроморфологія Aspergillus sp., Виділеного з уражених нігтів

.

Мал. 3.2.13.

Мікроморфологія Ulocladium sp, виділеного з уражених нігтів

.

Мал. 3.2.14.

Мікроморфологія Chaetomium sp., Виділеного з уражених нігтів

.

Рис 3 2 15

Панель поживних ФЕД для ідентифікації дерматофитов

(Зліва - культура Т rubrum, праворуч - Т mentagrophytes var. Mterdigitale). Зліва направо: середа Сабуро, середа Бакстера, середа Хрістенсен, кукурудзяний агар

Слід врахувати, що деякі цвілеві гриби, в тому числі дерматофіти, в культурі виростають повільно, за 2-3 тижнів.

Навіть при дотриманні всіх правил збору матеріалу, при хорошому обладнанні лабораторії і високої кваліфікації її персоналу число позитивних результатів культурального дослідження дуже невелика. За даними зарубіжної літератури, відсоток позитивних досліджень не перевищує 50.

Відсоток позитивних результатів в кращих вітчизняних лабораторіях ледве сягає 30. Таким чином, в 2 з кожних 3 випадків оніхомікозу його етіологію встановити не вдається.

Інтерпретація отриманих результатів

Оскільки різні гриби беруть неоднакову участь в поразках нігтів, результати культурального дослідження слід оцінювати теж по-різному.

Виділення з уражених нігтів гриба-дерматофіти незаперечно свідчить про дерматофітозами нігтів, викликаному цим грибом.

Виділення з нігтів Candida spp. само по собі ні про що не говорить і має значення тоді, коли, по-перше, є клінічні прояви і, по-друге, псевдомицелий Candida spp. видно при мікроскопії уражених нігтів.

Виділення цвілевих грибів може бути діагностично значущим тільки тоді, коли ці гриби отримані окремо, а не разом з дерматофітами, якщо вони виділені в 5 з 20 культур і якщо в патологічному матеріалі виявляється міцелій цих грибів. Ці критерії запропоновані М. English в 1976 р

Інші випадки виділення цвілевих грибів слід розцінювати або як контамінацію, або як змішану інфекцію. Для аерогенної контамінації характерне зростання колоній гриба не навколо досліджуваного матеріалу, а по всій поверхні середовища (рис. 3.2.16).

Мал. 3.2.16.

Аерогенне контамінація Alternaria sp

.

Змішані інфекції, спричинені дерматофітами разом з іншими грибами, зустрічаються досить часто, особливо у літніх людей. Не варто дивуватися, якщо в культурі одночасно виростають колонії грибів 3 видів і навіть більше (рис. 3.2.17, 3.2.18).

Мал. 3.2.17.

Змішана інфекція, викликана Т. rubrum і Curvularia sp

. Виділена з уражених нігтів на кукурудзяному агарі.

Мал. 3.2.18.

Змішана інфекція Scopulariopsis sp. і Т. mentagrophytes var. interdigitale

.lt; lt; ПопереднєНаступна gt; gt;

Увага, тільки СЬОГОДНІ!