Тести на антиспермальні антитіла, як проводяться
Які тести слід використовувати для визначення антиспермальних антитіл?
Єдині надійні тести на антиспермальні антитіла - це ті, за допомогою яких враховують приєднання антитіл до поверхні живого рухомого сперматозоїда.
Використання нежиттєздатною сперми для тестування неприпустимо, тому що антитіла прилипають неспецифически до неї, даючи хибнопозитивні результати.
Як диференціювати різні тести для визначення антиспермальних антитіл? З тестів на антиспермальні антитіла інтерес представляють тільки ті, які дозволяють визначити зв`язування антитіл з поверхнею живих рухливих сперматозоїдів.
Аналіз зв`язування імуноглобулінів
Аналіз зв`язування імуноглобулінів здійснюють за допомогою кульок, вкритих антитілами проти різних ізотипів імуноглобулінів - IgG, IgA і IgM.
Антитіла в сперматозоїдах
З метою визначення антитіл в еякулював сперматозоїдах свіжий зразок сперми кілька разів відмивають для видалення насінної рідини і потім інкубують сперматозоїди з різними кульками, покритими антитілами. Антитіла на кульках зв`язуються з антиспермальних антитіл на сперматозоїдах. Через кілька хвилин зразок поміщають на предметне скло і досліджують під мікроскопом. 100 рухливих сперматозоїдів перевіряються на наявність кульок, які пов`язані з поверхнею їх головки, середнього відділу або хвоста. Відзначають кількість рухливих сперматозоїдів з кулькою, що припадають на кожен ізотип антитіл, і ділянку зв`язування на кожному сперматозоїді.
Антиспермальні антитіла в сироватці
Для визначення антиспермальних антитіл в сироватці або цервікальногослизу сперматозоїди від партнера (переважно) або від донора сперми доведеною фертильності, що пройшов обстеження на наявність антиспермальних антитіл на поверхні сперматозоїдів, яке показало негативні результати, інкубують з розведенням сироватки або цервікальногослизу при 37 градусів С протягом 60 хв. Потім сперматозоїди ретельно відмивають для видалення будь-яких незв`язаних антитіл і визначають скупчення антитіл із сироватки або цервікальногослизу на поверхні сперматозоїдів за допомогою кульок (bead binding), як описано вище.
Відео: Безпліддя 3. Індивідуальна несумісність і імунологія.
MAR тест
Для проведення тесту MAR неотмитую свіжу сперму змішують на предметному склі з еритроцитами барана, покритими IgG або IgA. Замість еритроцитів барана іноді використовують латексні частинки. Потім в розчин, що розглядається під мікроскопом, поміщають антитіла до людських IgG або IgA.
Відео: Аналіз крові на антитіла
Якщо на сперматозоїдах присутні антитіла, буде видно еритроцити, адгезірованних до сперматозоїдів. У підсумку, якщо є антиспермальні антитіла, буде видно великі агрегати сперматозоїдів.
Тест MAR можна також використовувати для визначення антитіл в сироватці шляхом інкубації вільних від антитіл сперматозоїдів з сироваткою, як описано для аналізу зв`язування імуноглобулінів, а потім перевірки на наявність сперматозоїдів, пов`язаних з антитілами.
І аналіз зв`язування імуноглобулінів, і тест MAR можуть бути модифіковані для визначення антиспермальних антитіл в цервікальногослизу. Цервікальногослизу спочатку необхідно розрідити шляхом інкубації в бромелін протягом короткого періоду. Зразок центрифугируют і поверхневий шар досліджують на антиспермальні антитіла за допомогою непрямого иммуноглобулинового аналізу або тесту MAR.
С.С.Bіткін
