Виділення днк і рнк з клітинних культур

Заморожений матеріал переносили в розчин ГТЦ і гомогенизировали 4-5 ударами в гомогенизаторе Даунса. Гомогенат прогрівали при 55 ° С протягом 5 хв, нашаровуються на подушку 5.7 М CsCl і центрифугували при 30 тис. Об / хв при 18 ° С протягом 18 год з використанням ротора SW50 (Beckman). Після центрифугування фракцію, яка несе клітинну ДНК і знаходиться на поверхні цезієвої "подушки", переносили в скляні пробірки, а час, що залишився вміст роторних пробірок зливали. Осад РНК, що знаходиться на дні пробірок, розчиняли в бидистиллированной воді і переосаждалі ацетатом

№ рН 5.0 - етанолом (див. "Матеріали і методи", п. 13).

х

До фракції ДНК додавали 4 обсягу буфера 1 STE - 1% SDS. Потім додавали рівний об`єм суміші хлороформ - ізоаміловий спирт (24: 1) і екстрагували ДНК 5 хв. Після поділу фаз центрифугуванням відбирали верхню фазу і процедуру повторювали. Потім ДНК брали в облогу 3

обсягами етанолу і центрифугували при 20 тис. об / хв при 4 ° С. осад

х

ДНК промивали 75% етанолом на 1 STE, висушували і розчиняли в бидистиллированной воді.lt; lt; ПопереднєНаступна gt; gt;

Увага, тільки СЬОГОДНІ!