Матеріали і методи досліджень

Відео: Лекція 2.5 | Методи дослідження наноструктур. Види і принципи роботи пристроїв дослідження

Відбір проб проводять з трахеї, легких, повітроносних мішків, ексудату, кісткового мозку, підочноямковим синусів, вміст кишечника і клоаки, з печінки, головного мозку, селезінки, крові (рисунок 15). Від хворих і трупів полеглих каченят, крім цього, беруть зіскрібки зі слизової оболонки носа, гортані і підочноямковим синусів. Матеріал для подальших дослідженні зберігають в охолодженому, краще замороженому вигляді. Для виділення вірусу ДП використовують 9-11 - денні курячі ембріони, які заражають в аллантоісную або амніотичну порожнину. Всі штами вірусу А1 (класичної чуми птахів) викликає загибель ембріонів через 25-36 годин після зараження, зі зростанням вірулентності збудника в міру збільшення кількості пасажів, до 107-108 ЕЛД 50 / мл.

Після виділення проводять серологічну ідентифікацію вірусу, визначаючи специфічну антигенні здатності штаму в РЗГА, РН в ембріонах курей, ІФА, реакція гальмування нейрамінідазою активності (РТНА), реакція радіального гемолізу, в РДП (визначаючи схожість гемаглютиніну і нейрамінідази), в полимеразой ланцюгової реакції (ПЛР ) - для визначення геному вірусу, виявлені вірусної нуклеїнової кислоти в пробах патологічного матеріалу і в аллантоісной рідини заражених курячих ембріонів, а також для диференціації антигенних підтипів ви руса. Біопроба проводитися внутрішньовенним зараженням курчат аллантоісной рідиною ембріонів курей, інфікованих виділенням изолятом вірусу ДП. Якщо з 10 курчат протягом 10 днів гине 6 голів, то виділений вірус ДП вважається високопатогенним.

Малюнок 15 - Відбір проб матеріалів (серце, селезінка)



Схема лабораторної діагностики пташиного грипу показана на малюнку 16. Застосовувані в даний час методи лабораторної діагностики грипу птахів можна розділити на чотири групи:

серологічні реакції

- Реакція гемаглютинації (РГА)

- Реакція тормаженіі гемгглютінаціі (РГГА)

- Імуноферментний аналіз (ІФА)

- Реакція нейрамінідази (РИНА)

- Реакція нейтралізації (РН)

виділення вірусу

- Реакція на курячих ембріонах

- Культура клітин MDCK, Vero

Молекулярно-генетичні дослідження

- Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР)

- Реал-тайм ПЛР

- Розшифровка геному вірусу

Електронно-мікроскопіческіеісследованія

- Вивчення морфології Віру

- Електронно-мікроскопічне фотографування РДА

Для ідентікаціі вірусу в патологічному матеріалі можна використовувати РДА. Надосадову рідину після центрифугування суспензії проб з органів і тканин хворої птахів, а також змивів досліджують в крапельної або пробіркових РДА з 1% суспензії еритроцитів курей або 0,5% суспензією еритроцитів морської свинки. Реакцію враховують через 20 хвилин і 1 годину. Специфічність визначають в РГГА [35].

Ідентифікацію випробуваного вірусу проводять з набором еталонних штаммоспеціфіцескіх грипозних сироваток до його нтігенним варіантів. Для диференціації в реакцію вводять сироватку проти вірусу БН. РГГА ставлять мікро- або макрометодом за загальноприйнятою методикою [36].

Малюнок 16 - Лабораторна діагностика пташиного грипу



Діагностика грипу комплексна з обов`язковим виділенням, ідентифікацією вірусу і постановкою біопроби. Для ретроспективної серологічної діагностики використовують РЗГА. Для серологічних досліджень використовують РДП, РНГА, МФА, РСК, а також метод імуноферментного аналізу (ІФА), призначений для експрес титрування антитіл до вірусу ДП по гемаглютиніну і нейрамінідазі.

При проведенні імуноферментного аналізу (ІФА) використовують обладнання, показане на малюнку 17. На малюнку 18 показані схеми профеденія ІФА.

Відео: Навчальні матеріали

Малюнок 17 - Обладнання для проведення ІФА

Відео: Сучасні методи дослідження гортані у дорослих і дітей

Малюнок 18 - Схеми методу ІФАСхема методу ІФА подвійних антитіл

«Сендвіча» для визначення антигену Схема «непрямого» методу ІФА для

визначення антитіл

У полимеразой ланцюгової реакції (ПЛР) - визначають геном вірусу, виявлені вірусної нуклеїнової кислоти в пробах патологічного матеріалу і в аллантоісной рідини заражених курячих ембріонів, а також для диференціації антигенних підтипів вірусу. При постановці реакції використовують такі обладнання (рисунок 19):

Малюнок 19 - Обладнання для ПЛРlt; lt; ПопереднєНаступна gt; gt;

Увага, тільки СЬОГОДНІ!